水中葉綠素a的測定步驟

水中葉綠素濃度是浮遊生物分布的指標，是衡量水體(ti) 初級生產(chan) 力和富營養(yang) 化作用的最基本的指標。葉綠素分為(wei) 葉綠素a和b，當前研究更關(guan) 注葉綠素a的濃度。浮遊植物的大量生長是水體(ti) 富營養(yang) 化的主要現象，其中葉綠素a是所有浮遊植物門類都含有的葉綠素類型，不僅(jin) 作為(wei) 水體(ti) 營養(yang) 狀態劃分的重要指標，而且可用於(yu) 表征浮遊植物的現存量。因此，葉綠素a在水體(ti) 富營養(yang) 狀況評價(jia) 中起關(guan) 鍵性作用。

葉綠素a本身對環境沒有危害，但它是估算浮遊植物生物量的重要指標，可以通過測定水中浮遊植物葉綠素a的含量，掌握水體(ti) 的初級生產(chan) 力情況和富營養(yang) 化水平，在環境監測中，葉綠素a含量是評價(jia) 水體(ti) 富營養(yang) 化的指標之一。國際上，經濟合作與(yu) 發展組織（OECD）規定了關(guan) 於(yu) 評定湖泊營養(yang) 狀態的葉綠素a劃分標準。我國原地表水環境質量標準（GHZB1-1999）中規定了葉綠素a標準值，但是現行有效的地表水環境質量標準（GB3838-2002）沒有葉綠素a的標準值。

水中葉綠素a的測定步驟具體(ti) 是什麽(me) 呢？

（1）提取試劑

除熱乙醇法，國內(nei) 外標準方法均采用90%丙酮作為(wei) 提取試劑。EPA446.0指出，90%丙酮溶液可以有效提取大部分藻類細胞中的葉綠素a，而且不產(chan) 生其他衍生物。丙酮是國際上較為(wei) 公認的提取葉綠素的試劑

（2）濾膜

除《水和廢水檢測分析方法（第四版）》采用乙酸纖維濾膜外，均采用玻璃纖維濾膜。

（3）樣品保存方法

樣品的保存條件各種方法略有不同，但水樣采集後均保證4℃冷藏保存，樣品濾膜可冷凍保存。而且葉綠素a測定樣品濾膜冷凍後再研磨，可提高提取效率。在《浮遊植物中葉綠素a提取方法的比較與(yu) 改進》的研究結果。如采樣後不立刻測定，-18℃下冰凍，再於(yu) 室溫條件下融解，利用細胞內(nei) 冰粒的形成和細胞液濃度的增高引起溶漲，使胞壁結構破碎引起葉綠素溶出。

（4）是否研磨及研磨後是否需要浸泡

雖然研磨的方法較為(wei) 費力，但是該方法操作簡單，儀(yi) 器設備要求低，常溫操作不會(hui) 對葉綠素a造成破壞，細胞破碎完全，對葉綠素的提取速度快，效率高，並在環境監測係統廣泛應用，考慮到方法的經典性和數據的可沿用性，新的技術線路中關(guan) 於(yu) 對葉綠素a的提取步驟沿用《水和廢水監測分析方法（第四版）》中的研磨方法，研磨提取葉綠素a，主要通過機械作用破壞藻類的細胞壁和葉綠體(ti) 使葉綠素a溶解於(yu) 丙酮，並在此基礎上進行改進。

（5）計算公式及波長

關(guan) 於(yu) 計算方法，主要有三色法和單色法，三色法主要考慮了葉綠素b和葉綠素c對測定的幹擾，測定的是表觀葉綠素a的含量（包括葉綠素a與(yu) 脫鎂葉綠素a之和），單色法考慮脫鎂葉綠素a的幹擾。從(cong) 方法的簡便性來說，三色法操作簡單，產(chan) 生誤差幾率小，耗時比單色法短；目前《水和廢水監測分析方法（第四版）》中測定葉綠素a的方法在地表水環境監測中應用最為(wei) 廣泛，該方法采用丙酮研磨提取葉綠素a，用三色法計算葉綠素a的濃度。