生活飲用水中的大腸菌群檢測方法的比較研究

總大腸菌群是一群能發酵乳糖、產(chan) 酸產(chan) 氣、需氧和兼性厭氧、革蘭(lan) 氏陰性的無芽孢杆菌。總大腸菌群主要來源於(yu) 人畜糞便，是水源是否受到糞便汙染的主要標準。目前，總大腸菌群是國內(nei) 外檢測生活飲用水汙染情況的重要指標。總大腸菌群作為(wei) 評價(jia) 飲用水衛生質量的重要指標之一，它的檢測具有廣泛的衛生學意義(yi) 。目前，中國環保部門檢測總大腸菌群的方法主要有多管發酵法(Multiple-tube fermentation, MTF)、濾膜法(Membranefilter, MF)、快速紙片法(Paperstrip method)。其中發酵法是傳(chuan) 統的檢測方法，這種檢測技術普遍得到了世界各國的應用。該檢測方法的優(you) 點是檢測原理簡單，檢測人員經過基本的微生物學培訓就可以操作。濾膜法檢測總大腸菌群成本較低，操作步驟比較簡單。

快速紙片法以其操作簡便、檢測周期短等優(you) 點目前備受檢測人員的青睞，多管發酵法和濾膜法目前已經被世界各國實驗室和世界各組織機構認可，這3種方法已經被認定為(wei) 國家標準方法。

多管發酵法、濾膜法和快速紙片法應用於(yu) 總大腸菌群檢測中，都能準確地評價(jia) 水樣受到總大腸菌群汙染的狀況，但是3種方法都有各自的優(you) 缺點，在實際檢測中應該根據具體(ti) 情況分析選擇適合的檢測方法。通過對總大腸菌群檢測方法的分析比較，多管發酵法準備工作量大，操作複雜，周期長，不適於(yu) 大量樣品的分析，也不能對水的衛生學狀況作出快速評價(jia) ，無法滿足樣品快速檢測的需求。濾膜法是一種科學可行的檢驗方法，適用於(yu) 飲用水和混濁度較小的水樣。快速紙片法操作簡便、檢測周期短，也已經列入生活飲用水標準檢測方法，極有可能在近期成為(wei) 評價(jia) 水質汙染的快速檢測方法之一。

濾膜法檢測周期較短，最短隻需要24 h，並且不需要驗證試驗。在本試驗中，濾膜法較其他兩(liang) 種方法檢測結果偏低，原因是菌落在濾膜上分布不均勻，導致菌落辨別時存在幹擾。快速紙片法檢測總大腸菌群成本較高，但檢測結果可靠，能夠較精確地判斷水樣的汙染狀況。從(cong) 檢測結果來看，3種方法檢測結果無顯著差異，但是快速紙片法檢出率陽性略高於(yu) 發酵法和濾膜法，因此可以推斷快速紙片法的敏感性略高於(yu) 發酵法和濾膜法。

對多管發酵法、濾膜法和快速紙片法的檢測結果進行統計學比較，在120份水樣中，多管發酵法共檢出總大腸菌群23份，濾膜法共檢出總大腸菌群21份，采用快速紙片法共檢出總大腸菌群25份，3種不同方法對比，檢測結果無顯著差異(P>0.05)。

多管發酵法和濾膜法是傳(chuan) 統的檢測大腸菌群的方法，缺點是操作步驟比較繁瑣，檢測周期長，幹擾因素多，並且需要進行驗證試驗。但是這類檢測方法操作技術比較簡單，容易進行，並且檢測費用低。尤其是多管發酵法，目前仍然是水體(ti) 汙染監測中最主要的檢測方法。快速紙片法克服了前兩(liang) 種檢測方法的不足，優(you) 化了檢測過程。快速紙片法操作更簡便，檢測時間短，無須提前準備培養(yang) 基，並且不需要進行驗證試驗，能夠準確地判斷水樣的總大腸菌群汙染狀況，並且此種方法已經被列為(wei) 國家標準檢驗法。

快速紙片法是以紙片作為(wei) 培養(yang) 基載體(ti) ，將總大腸菌群生長過程所需要的營養(yang) 物質、指示劑以及能夠抑製革蘭(lan) 氏陽性細菌生長的物質附著在紙片上，細菌在繁殖時，在37℃下培養(yang) 24 h，觀察結果。試驗過程中，每個(ge) 水樣按3個(ge) 10倍濃度梯度接種，共接種15張紙片。其中5張大紙片接種10 m L水樣，5張小紙片接種1 mL水樣，另外5張小紙片接種1∶10稀釋水樣1 mL。紙片上出現紅斑或者紅色菌落而且周圍變黃色的為(wei) 陽性。根據陽性紙片張數，查MPN值表，然後計算每升水樣中總大腸菌群數的最近似值。

將水樣注入已滅菌的濾器中，采用0.45μm的微孔濾膜過濾水樣，經過抽濾，細菌被截留在膜上，然後將濾膜貼於(yu) M-FC(品紅亞(ya) 硫酸鈉)培養(yang) 基上，在37℃下培養(yang) 24 h。總大腸菌群在濾膜上長出黃色的特征菌落，直接計數此類菌落數目，計算每升水樣中含的總大腸菌群數。對於(yu) 可疑的菌落，可取一部分進行塗片、染色、鏡檢。另一部分接種於(yu) EC培養(yang) 液內(nei) ，經37℃培養(yang) 24 h後觀察是否產(chan) 氣，如果產(chan) 氣則證明為(wei) 總大腸菌群。然後計算每升水樣中總大腸菌群數的最近似值。

利用總大腸菌群繁殖時能夠發酵乳糖、產(chan) 酸產(chan) 氣，並能使乳糖蛋白腖培養(yang) 液變黃，同時產(chan) 生氣泡。初發酵試驗：將水樣充分混勻後，根據水樣汙染的程度進行適當稀釋。取每個(ge) 樣品1.00、0.10、0.01 mL分別接種到盛有乳糖蛋白腖培養(yang) 液的發酵管中，在37℃下培養(yang) 24 h。產(chan) 酸和產(chan) 氣的發酵管試驗結果表明，水樣中存在可疑菌群。複發酵試驗：將可疑菌落繼續接種到EC培養(yang) 基上並在37℃培養(yang) 24 h，在培養(yang) 期間如果仍然產(chan) 酸產(chan) 氣，則認定可疑菌落為(wei) 總大腸菌群。依據陽性發酵管的數量查MPN表，計算每升水樣中總大腸菌群數的最近似值。

本研究通過對比分析多管發酵法、濾膜法以及快速紙片法檢測生活飲用水中總大腸菌群的試驗結果，探討3種方法在生活飲用水中的總大腸菌群檢測中的應用情況。